Transfection Optimization for Expression of the Recombinant Monoclonal Antibody against Plasmodium falciparum Lactate Dehydrogenase in Mammalian Cells = การหาสภาวะที่เหมาะสมในการนำพลาสมิดเข้าสู่เซลล์เพื่อสร้างรีคอมบิแนนท์โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อเอนไซม์แลคเต

Panadda Dhepakson, Apichai Prachasuphap, Duangrat Jullaksorn, Anicha Luengchaichaweng, Sakulrat Soonthornchattrawat, Porntip Chaiya

Abstract


Recombinant plasmid pcDNA-pLDHAbHC LCK/C10 containing immunoglobulin gene encoding monoclonal antibody against lactate dehydrogenase enzyme of Plasmodium falciparum (pLDH) has been developed in our previous study. This study was aimed to optimize the condition of transfection reagent for expression of the recombinant monoclonal antibody against pLDH in 293F cells. By optimizing transfection condition for a commercial pEGFP-N1 plasmid to transfection reagent, the optimal ratio was at 1 µg:1.2 µl in 293F cells. By this ratio, the plasmid pcDNA-pLDHAbHC LCK/C10 was also transfected into 293F cells to express the recombinant monoclonal antibody and maximal level was found in culture supernatant at day 4 as determined by ELISA. The recombinant monoclonal antibody protein pattern was similar to that of the mouse monoclonal antibody against pLDH as analyzed by SDS-PAGE and Western blotting. Furthermore, this monoclonal antibody could react specifically to pLDH antigen in P. falciparum infected cells by IFA. Thus, the recombinant monoclonal antibody had potential in development for P. faciparum malarial diagnosis.

Key words: Recombinant Plasmodium falciparun monoclonal antibody, 293F cells, transfection, Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase

การศึกษาที่ผ่านมาคณะผู้วิจัยได้พัฒนาพลาสมิด pcDNA-pLDHAbHC LCK/C10 ที่บรรจุยีนอิมมูโนโกลบูลิน ที่จำเพาะต่อเอนไซม์แลคเตทดีไฮโดรจีเนสของ Plasmodium falciparum (pLDH) เพื่อใช้ในการสร้างรีคอมบิแนนท์โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อ pLDH การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาสภาวะที่เหมาะสมในการสร้างและผลิตรีคอมบิแนนท์แอนติบอดีต่อ pLDH ในเซลล์ 293F โดยศึกษาอัตราส่วนของพลาสมิดที่มีในท้องตลาด pEGFP-N1 ต่อปริมาตรน้ำยา transfection ที่นำพลาสมิดเข้าสู่เซลล์ พบว่าอัตราส่วนระหว่างพลาสมิดดังกล่าวต่อน้ำยา transfection คือ 1 µg: 1.2 µl และเมื่อใช้อัตราส่วนดังกล่าวในการนำพลาสมิด pcDNA-pLDHAbHC LCK/C10 เข้าสู่เซลล์ 293F พบว่ามีการสร้างรีคอมบิแนนท์แอนติบอดีสูงสุดในวันที่ 4 หลังจากการ transfection เมื่อทดสอบโดยวิธี ELISA การศึกษาคุณสมบัติของรีคอมบิแนนท์โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ได้ โดย SDS-PAGE และ Western blotting พบว่า มีลักษณะไม่แตกต่างจากโมโนโคลนอลแอนติบอดีของหนู และพบว่ารีคอมบิแนนท์โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ได้มีความจำาเพาะกับ pLDH ของเชื้อ P. falciparum ในเซลล์เม็ดเลือดแดงเมื่อทดสอบโดยวิธี IFA ดังนั้นรีคอมบิแนนท์โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่สร้างได้นี้ จึงมีความเป็นไปได้ที่จะนำาไปพัฒนาสำาหรับการตรวจวินิจฉัยโรคมาลาเรียที่เกิดจากเชื้อ P. falciparum

Full Text:

Full Text in Thai


Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 3.0 License.

Bulletin of the Department of Medical Sciences - วารสารกรมวิทยาศาสตร์การแพทย์  ISSN: 0125-684X

Journal Contact